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ELISA试剂盒使用过程应注意事项与问题解决办法
2023.04.17   点击999次

注意事项:

1、严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2、洗板不正确可能导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔出现干燥情况。

3、消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。

4、底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。

5、避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6、在储存和温育时避免强光直接照射;所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和微生物的污染。

7、任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

8、不能使用过期产品,不同货号和批号组分不得混用,不同制造商产品不能混用。

9、试剂盒以外来源的重组蛋白可能会出现与本试剂盒抗体不匹配而不被识别的情况。

10、如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。

问题与解决办法:

问题可能原因解决方案
标准曲线差标准品准备不正确进行正确的标准品梯度稀释
吸取及洗涤不充分充分的吸取及洗涤
移液不精确检查和校正移液器
精密度低洗涤不充分按说明书要求充分洗涤和浸泡
混匀不充分和吸取试剂不足充分混匀和吸取试剂
重复利用吸头、容器和覆膜使用加样器要更换新的吸头、使用新的容器和覆膜
加样不精确检查和校正移液器
O.D值低每孔加的试剂量不精确校正移液器,精确加入试剂
温育时间不正确保证充足的温育时间
温育温度不正确试剂要平衡至室温并保证准确的温育温度
酶标记物或底物失效通过混合酶标记物和底物,颜色应迅速显现来检查
没有加入终止液按照说明书实验操作步骤加入终止液
超出读数时间读数在说明书推荐的读数时间内读数
样本值不正确的样本储存方式正确储存样本,使用新鲜样本进行实验
不正确的样本收集和处理方法采取正确的样本收集和处理方法
待测物质在样本中含量低使用新鲜样本,重复实验
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